Produção de oócitos em mamíferos adultos: o camundongo como modelo / Oocyte production in adult mammals: mice as the model

Objetivo: identificar produção de oócitos em mamíferos adultos com o uso de camundongo como modelo experimental. Método: empregamos a técnica de imuno-histoquímica em cortes de ovários de camundongos Balb-c (45 dias de idade) com o uso de anticorpo específico para marcação de células germinativas. Como controles positivos da reação, usamos cortes de testículos de camundongos. Resultados: as células germinativas (espermatogônias, espermatócitos e espermátides) dos controles positivos sofreram marcação, enquanto células não pertencentes a essa linhagem (células de Leydig e de Sertoli) mostraram negatividade de reação; nos cortes ovarianos observou-se marcação de oócitos de folículos em diferentes estágios de maturação, mas houve também marcação de células não englobadas pela estrutura folicular. Conclusões: os achados sugerem que durante a puberdade ovários de camundongos fêmeas contêm células da linhagem germinativa em estágios anteriores à formação folicular, o que corrobora estudos anteriores; o trabalho é pioneiro no Brasil e progredirá para a completa caracterização de células com potencial oogênico em outras espécies de mamíferos. Resultados positivos poderão alterar o entendimento da biologia reprodutiva e abrir novas portas para o tratamento de infertilidade.

Objective: to identify oocyte production in adult mammals using the mouse as the experimental model. Method: we used the immunohistochemistry technique on ovary sections of Balb-c mice (45 days old), with antibody that labels germline cells specifically. We used sections of mice’s testes as positive reaction controls.Results: in testes samples, germ cells (spermatogonia, spermatocytes and spermatids) were stained, while cells not belonging to germ lineage (Leydig and Sertoli cells) showed negativereaction; in ovarian samples, oocytes from follicles in different stages of maturation werestained, but the reaction was also positive for cells not enclosed by the follicular structure. Conclusions: the findings suggest that, during puberty, female mice ovaries contain germline cells in earlier stages before follicular formation, as was found in previous studies. Thework, pioneering in Brazil, must progress to a complete characterization of these cells (with oogenesis potential) in mice and in other mammal species. Positive results may change the understanding of the reproductive biology and open new possibilities for infertility treatment.

Influência da decorticação vertebral na neoformação dos tecidos da interface do enxerto ósseo / Influence of vertebral decortication on tissue neoformation at bone graft interface

OBJETIVO: Determinar a influência da decorticação dos elementos posteriores da coluna vertebral na integração do enxerto ósseo, considerando a avaliação quantitativa e qualitativa dos tecidos (ósseo, cartilaginoso e fibroso) da interface entre o leito receptor e o enxerto ósseo. MÉTODOS: Foram utilizados 24 ratos Wistar, divididos em dois grupos de acordo com a realização da decorticação do leito receptor do enxerto. Foi utilizado enxerto autólogo derivado dos processos espinhosos das duas primeiras vértebras lombares. A neoformação tecidual na interface entre o leito receptor e seu enxerto ósseo foi avaliada após três semanas por meio de análise histomorfométrica. RESULTADOS: No grupo de animais com o leito receptor decorticado a média da porcentagem de osso neoformado foi de 40 por cento±6,1, e 7,7 por cento± 3,5 no grupo não decorticado (p=0,0001). A média da porcentagem de formação do tecido cartilaginoso no grupo decorticado foi de 7,2 por cento±3,5, no não decorticado de 10,9 por cento±5,6 (p=0,1123). A formação de tecido fibroso no grupo decorticado apresentou média de 8,6 por cento±3,9 e no não decorticado e 24 por cento±10,1, (p=0,0002). CONCLUSÕES: A decorticação acelerou o processo histológico da integração do enxerto ósseo. Ocorrendo maior produção de tecido ósseo neoformado e predomínio da ossificação do tipo intramembranosa no grupo de animais nos quais a decorticação foi realizada.

OBJECTIVE: To determine the influence of vertebral posterior elements decortication in bone graft integration, considering a qualitative and quantitative evaluation of the (bone, cartilaginous, and fibrous) tissues in the interface between the receptor bed and the bone graft. METHODS: Twenty-four Wistar rats were divided into two groups according to the decortication of the bone graft receptor bed. Autologous bone graft from the first and second lumbar vertebrae were used. The new tissue formation in the interface between the receptor bed and its bone graft was evaluated after three weeks by histomorphometric analyses. RESULTS: In the animals group with the decorticated posterior bed the mean percentage of new bone formation was 40 percent±6.1, and 7.7 percent± 3.5 in the not decorticated group. A(p=0.0001). The mean percentage of cartilaginous tissue formation in the decorticated group was 7.2 percent±3.5, and in the not decorticated 10.9 percent±5.6 (p=0.1123). The fibrous tissue formation in the decorticated group presented a mean of 8.6 percent±3.9 and, in the not decorticated group, of 24 percent±10.1, with which is a statistically significant difference (p=0.0002). CONCLUSION: Decortication accelerated the histologic process of bone graft integration. More production of new bone tissue and predominance of intramembranous type of ossification occurred in the decorticated group.

Estudo microscópico da interface implante-osso vertebral e sua relação com o modo de preparo do orifício piloto / Estudio microscópico de la interface implante hueso vertebral y su relación con el modo de preparación del orificio piloto / Microscopical study of the bone screw interface and its correlation with the pilot hole preparation

OBJETIVO: estudar as alterações do tecido ósseo da interface entre o implante e o osso da vértebra submetido ao preparo do orifício piloto por meio de sonda, broca e broca seguida de macheamento. MÉTODOS: foram utilizadas três vértebras lombares (l2-L3-L4) de cadáveres humanos adultos do sexo masculino. No interior dos pedículos vertebrais, foram inseridos parafusos de 6 mm de diâmetro externo do sistema USIS de fixação vertebral. O preparo do orifício piloto para a inserção dos parafusos nos pedículos vertebrais foi realizado por meio de sonda, broca ou broca seguida de macheamento. As vértebras foram preparadas para o estudo em microscopia de luz e foi avaliado o coeficiente de fragmentação por meio da relação entre a porcentagem da área ocupada por tecido ósseo na região próxima do implante e no osso normal. RESULTADOS: o coeficiente de fragmentação foi menor, com diferença estatística, no grupo do orifício piloto preparado com sonda em relação ao orifício piloto preparado com broca ou broca seguida de macheamento. CONCLUSÃO: o menor coeficiente de fragmentação observado com a utilização da sonda para a realização do orifício piloto indica a maior compactação do osso na interface entre o implante e o osso da vértebra

OBJECTIVE: to access microscopically bone tissue changes between vertebral bone and implant interface, whose pilot hole was prepared using probe, drill and drill followed by tapping. METHODS: the vertebral pedicles of three segments (L2-L3-L4) of human adult cadaver lumbar spine were instrumented with 6 mm USIS pedicle screw. The pilot holes for screw insertion into pedicles were prepared using probe, drill and drill followed by tapping. The vertebrae were prepared to histological study on light microscopy and the fragmentation index assessed by percentage relation between bone tissue close to the implant and normal bone. RESULTS: the fragmentation index of pilot holes prepared with probes was statistically lower than those prepared with drill and drill followed by tapping. CONCLUSION: the low fragmentation index observed that the use of probe to perform pilot hole promotes higher compaction of bone between the screw and vertebral bone interface.

OBJETIVO: estudiar las alteraciones del tejido óseo de la interfase entre el implante y el hueso de la vértebra, sometido al preparo del orificio piloto por medio de sonda, broca y broca seguida de aplastamiento. MÉTODOS: fueron utilizadas tres vértebras lumbares (L2-L3-L4) de cadáveres humanos adultos del sexo masculino. En el interior de los pedículos vertebrales fueron insertados tornillos de 6 mm de diámetro externo del sistema USIS de fijación vertebral. El preparo del orificio piloto, para la inserción de los tornillos en los pedículos vertebrales, fue realizado por medio de sonda, broca o broca seguida de aplastamiento. Las vértebras fueron preparadas para el estudio en microscopio de luz y fue evaluado el coeficiente de fragmentación por medio de la relación entre el porcentaje del área ocupada por el tejido óseo en la región próxima del implante y en el hueso normal. RESULTADOS: el coeficiente de fragmentación fue menor con diferencia estadística en el grupo del orificio piloto preparado con sonda, cuando comparado con el orificio piloto preparado con broca o broca seguida de aplastamiento. CONCLUSIÓN: el menor coeficiente de fragmentación observado con la utilización de la sonda para la realización del orificio piloto indica la mayor compactación del hueso, en la interface entre el implante y el hueso de la vértebra.

Estudo histomorfométrico da interface óssea do parafuso expansor cervical / Histomorphometric analysis of bone-screw interface of expansive cervical screw

OBJETIVO: Realizar estudo experimental para a avaliação histomorfométrica da interface óssea dos parafusos expansores utilizados no sistema de fixação anterior da coluna cervical. Métodos: Foram utilizadas no estudo cinco vértebras cervicais de ovelhas (C4), nas quais os parafusos foram inseridos. O parafuso expansor de 18,5mm de comprimento e 5,0mm de diâmetro externo (Ulrich) foi inserido em ambos os lados da véterbra C4. No lado esquerdo o parafuso era inserido sem o parafuso interno de expansão e, no lado direito, com o parafuso de expansão interna. Na porção inferior da vértebra foi confeccionado o orifício-piloto com broca de 2,5mm sem a introdução de implante. A região da vértebra contendo os parafusos e o orifício-piloto foi preparada para estudo histológico da interface dos implantes e o tecido ósseo da parede do orifício-piloto. Por meio do estudo histomorfométrico foi avaliada a densidade óssea total, a densidade óssea externa (fora da rosca do parafuso), a densidade interna (dentro da rosca do parafuso) e a medida linear de contato entre o tecido ósseo e o implante. RESULTADOS: A densidade óssea total foi maior no grupo I (parafuso expandido) em relação ao grupo III (controle). A densidade óssea externa foi maior nos grupos I (parafuso expandido) e II (não expandido) em relação ao grupo III. A densidade interna foi maior no grupo I em relação aos grupos II e III e maior no grupo II em relação ao grupo III. O contato linear foi maior no grupo I em relação aos grupos II e III. CONCLUSÃO: As alterações da estrutura do tecido ósseo ao redor dos parafusos expansores, detectadas imediatamente após a sua aplicação, forneceram subsídios para o entendimento da maior resistência ao arrancamento desses implantes, que poderiam estar relacionadas com a compactação do osso esponjoso ao redor do mesmo, proporcionando maior área de contato entre o implante e o tecido ósseo.

OBJECTIVE: To perform an experimental study for the Histomorphometric analysis of the bone interface of expansive screws used in the anterior cervical spine fixation system. METHODS: Five sheep cervical vertebrae (C4) were used in the study, in which screws were inserted. The 18.5 mm long and 5.0 mm outer diameter expansive screws (Ulrich) were inserted in both sides of the C4 vertebra. On the left side, the screw was inserted without the internal expansive screw, which was used on the right side. A pilot hole was made on the lower portion of the vertebra with a 2.5 mm bore, but no implant was introduced. The vertebral region containing the screws and the pilot hole was prepared for a histological study of the interface between implants and bone screws, and of the pilot hole wall. Histomorphometric analysis evaluated total bone density, external bone density (outside the screw thread), internal density (inside the screw thread) and the linear measurement of the contact between bone tissue and the implant. RESULTS: Total bone density was greater in group I (expansive screw) as compared to group III (control). External bone density was greater in groups I (expansive screw) and II (non-expansive screw) when compared to group III. Internal bone density was greater in group I when compared to groups II and III, and greater in group II when compared to group III. Linear contact was greater in group I when compared to groups II and III. CONCLUSION: structural changes around expansive screws detected immediately after their application provide subsidies for a better understanding of the greater tearing resistance of the implant, which could be related to the compacting of cancellous bone around the implant, while providing a larger contact area between the implant and the bone tissue.

Estimulação ultra-sônica da integração de enxertos de pele total: estudo experimental em coelhos

Foi realizado um estudo histológico experimental da influência do ultra-som terapêutico na integração de enxertos de pele de espessura total em 20 coelhas adultas. Dois enxertos quadrados de 2 cm de lado foram obtidos nas regiões escapulares e trocados de lado. O enxerto à direita foi irradiado diariamente (3 MHz, 0,5 W/cm2, duração 5 minutos) desde o terceiro dia e por sete dias consecutivos; à esquerda, o tratamento era simulado. O estudo histológico em cortes de 5 æm de espessura obtidos de cada enxerto e corados alternativamente com o tricrômico de Gomori, PCNA e picrosírius, incluiu a medida das áreas da epiderme e da derme, a contagem das células em proliferação na camada germinativa e os vasos neoformados e a orientação das fibras colágenas. Foi observado aumento significante do número de células proliferativas (p=0,007) e dos vasos neoformados (p=0,0001) nos enxertos irradiados, mas não na área da epiderme e da derme. Os autores concluíram que o UST induz alterações morfológicas nos processos biológicos envolvidos na integração do enxerto de pele de espessura total, como a proliferação das células germinativas e a formação de novos vasos sangüíneos, e sugerem que há potencial para o uso clínico em humanos.

An experimental histological study was performed addressing the influence of therapeutic ultrasound on total-thickness skin grafts union in 20 adult female rabbits. Two 2-cm square-shaped grafts, were obtained at scapular regions with sides switched. The graft at right was irradiated on a daily basis (3 MHz, 0.5 W/cm2, for 5 minutes) from the third day on, during seven consecutive days; the graft at left received a sham treatment. The histological study in 5 æm-thick slides obtained from each graft and alternatively stained with Gomori trichromic, PCNA and picrosirius, included measurement of epidermal and dermal areas, proliferating cells on germinative layer counts, and neoformed vessels and collagen fibers direction. A significant increase of the number of proliferating cells (p=0.007) and of neoformed vessels (p=0.0001) was noticed on irradiated grafts, but not on epidermal and dermal areas. The authors concluded that the T-U/S induces morphological changes in biological processes involved on total-thickness skin graft union, such as germinative cells proliferation and new blood vessels formation, suggesting the potential for its clinical use in human beings.

Modelo experimental de endometriose em ratas - progressão do implante / Experimental model of endometriosis in rats - implant progression

OBJETIVOS: Desenvolvimento de um modelo experimental de endometriose em ratas, de modo que possibilitecaracterizar a progressão temporal da doença.MATERIAIS E MÉTODOS: Foram utilizadas 40 ratas albinas adultas, nas quais a endometriose foi induzida por meioda fixação de dois fragmentos de corno uterino de 5,0 x 4,0 mm na parede abdominal. Os animais foram submetidosà laparoscopia diagnóstica, com o objetivo de verificar a viabilidade e documentar o aspecto endoscópico daslesões, sendo sacrificados 20 deles após quatro semanas após indução (Grupo I, n=40 implantes) e 20 após oitosemanas (Grupo II, n=40 implantes). Os implantes foram medidos em seu maior comprimento e retirados, sendofixados e processados para análise morfológica.RESULTADOS: No Grupo I, a média do maior diâmetro passou para 5,897 mm (p<0,05) e no Grupo II, para 5,812 mm(p<0,05). A laparoscopia mostrou o aspecto cístico da maioria das lesões e a presença de novos vasos sangüíneospartindo da parede abdominal em direção ao implante. A análise microscópica dos implantes demonstrou umaarquitetura semelhante ao endométrio, com epitélio glandular e estroma típicos desse tecido. CONCLUSÕES: A utilização desse modelo, permitiu documentar as características e a progressão dos implantes através da laparoscopia, sendo também verificado seu crescimento e desenvolvimento histopatológico